Találati lista | Tudóstér

001-es BibID:	BIBFORM072540
Első szerző:	Bozóki Beáta (molekuláris biológus)
Cím:	A recombinant fusion protein-based, fluorescent protease assay for high throughput-compatible substrate screening / Beáta Bozóki, Lívia Gazda, Ferenc Tóth, Márió Miczi, János András Mótyán, József Tőzsér
Dátum:	2018
ISSN:	0003-2697
Megjegyzések:	In connection with the intensive investigation of proteases, several methods have been developed for analysis of the substrate specificity. Due to the great number of proteases and the expected target molecules to be analyzed, time- and cost-efficient high-throughput screening (HTS) methods are preferred. Here we describe the development and application of a separation-based HTS-compatible fluorescent protease assay, which is based on the use of recombinant fusion proteins as substrates of proteases. The protein substrates used in this assay consists of N-terminal (hexahistidine and maltose binding protein) fusion tags, cleavage sequences of the tobacco etch virus (TEV) and HIV-1 proteases, and a C-terminal fluorescent protein (mApple or mTurquoise2). The assay is based on the fluorimetric detection of the fluorescent proteins, which are released from the magnetic bead-attached substrates by the proteolytic cleavage. The protease assay has been applied for activity measurements of TEV and HIV-1 proteases to test the suitability of the system for enzyme kinetic measurements, inhibition studies, and determination of pH optimum. We also found that denatured fluorescent proteins can be renatured after SDS-PAGE of denaturing conditions, but showed differences in their renaturation abilities. After in-gel renaturation both substrates and cleavage products can be identified by in-gel UV detection.
Tárgyszavak:	Természettudományok Biológiai tudományok idegen nyelvű folyóiratközlemény külföldi lapban
Megjelenés:	Analytical Biochemistry. - 540-541 (2018), p. 52-63. -
További szerzők:	Gazda Lívia Diána (1989-) Tóth Ferenc (1980-) (molekuláris biológus) Miczi Márió Mótyán János András (1981-) (biokémikus, molekuláris biológus) Tőzsér József (1959-) (molekuláris biológus, biokémikus, vegyész)
Pályázati támogatás:	GINOP-2.3.2-15-2016-00044 GINOP
Internet cím:	Szerző által megadott URL DOI Intézményi repozitóriumban (DEA) tárolt változat
Borító:
Saját polcon:

001-es BibID:	BIBFORM050897
Első szerző:	Mótyán János András (biokémikus, molekuláris biológus)
Cím:	Research Applications of Proteolytic Enzymes in Molecular Biology / János András Mótyán, Ferenc Tóth, József Tőzsér
Dátum:	2013
ISSN:	2218-273X
Tárgyszavak:	Orvostudományok Elméleti orvostudományok idegen nyelvű folyóiratközlemény külföldi lapban folyóiratcikk proteolytic enzymes proteases molecular biology research applications
Megjelenés:	Biomolecules [electronic resource]. - 3 : 4 (2013), p. 923-942. -
További szerzők:	Tóth Ferenc (1980-) (molekuláris biológus) Tőzsér József (1959-) (molekuláris biológus, biokémikus, vegyész)
Pályázati támogatás:	TÁMOP-4.2.2.A-11/1/KONV-2012-0023-"VÉD-ELEM" TÁMOP 101591 OTKA
Internet cím:	Szerző által megadott URL DOI Intézményi repozitóriumban (DEA) tárolt változat
Borító:
Saját polcon:

001-es BibID:	BIBFORM065609
035-os BibID:	(WoS)000381049500006 (Scopus)85081459738
Első szerző:	Tóth Ferenc (molekuláris biológus)
Cím:	Effect of internal cleavage site mutations in human immunodeficiency virus type 1 capsid protein on its structure and function / Ferenc Toth, János Kádas, János András Mótyán, József Tőzsér
Dátum:	2016
ISSN:	2211-5463
Megjegyzések:	The capsid protein of the human immunodeficiency virus type 1 has been found to be a substrate of the retroviral protease in vitro, and its processing was predicted to be strongly dependent on a pH-induced conformational change. Several protease cleavage sites have been identified within the capsid protein, but the importance of its cleavage by the viral protease at the early phase of infection is controversial. To confirm the relevance of this process, we aimed to design, produce, and characterize mutant capsid proteins, in which the protein susceptibility toward HIV-1 protease is altered without affecting other steps of the viral life cycle. Our results indicate that while the introduced mutations changed the cleavage rate at the mutated sites of the capsid protein by HIV-1 protease, some of them caused only negligible or moderate structural changes (A78V, L189F, and L189I). However, the effects of other mutations (W23A, A77P, and L189P) were dramatic, as assessed by secondary structure determination or cyclophilin A-binding assay. Based on our observations, the L189F mutant capsid remains structurally and functionally unchanged and may therefore be the best candidate for use in studies aimed at better understanding the role of the protease in the early postentry events of viral infection or retrovirus-mediated gene transduction.
Tárgyszavak:	Orvostudományok Elméleti orvostudományok idegen nyelvű folyóiratközlemény külföldi lapban folyóiratcikk capsid protein circular dichroism spectroscopy cyclophilin A HIV-1 human immunodeficiency virus type 1 protease mutagenesis
Megjelenés:	FEBS Open Bio. - 6 : 8 (2016), p. 847-859. -
További szerzők:	Kádas János (1976-) (molekuláris biológus, biokémikus, kertészmérnök) Mótyán János András (1981-) (biokémikus, molekuláris biológus) Tőzsér József (1959-) (molekuláris biológus, biokémikus, vegyész)
Pályázati támogatás:	TAMOP 4.2.2.A-11/1/KONV-2012-0023 TÁMOP TAMOP 4.2.2.D-15/1/KONV-2015-0016 TÁMOP K-101591 OTKA
Internet cím:	Szerző által megadott URL DOI Intézményi repozitóriumban (DEA) tárolt változat
Borító:
Saját polcon: